随着分子检测的不断发展，甲基化qPCR检测以及甲基化NGS检测已成为非常普及的检测技术，这两种技术的必经之路就是甲基化转化，甲基化转化从方法学上可分为亚硫酸氢盐转化和酶法转化，近几年，基于DNA甲基化位点的检测试剂盒陆续获批面世。NMPA批准的甲基化检测试剂盒大部分为荧光PCR法，主要原因在于荧光PCR法操作简便，无需在PCR后电泳，且具有灵敏度高、特异性强、重复性好等特点。这些甲基化检测试剂采用的转化方法为亚硫酸氢盐转化法，亚硫酸氢盐转化成为DNA甲基化检测的“金标准”。但是传统的亚硫酸氢盐转化有很多局限性，例如过长的转化时间、严重的DNA损伤、被高估的5mC水平、C-U转化不完全等。
图1.亚硫酸氢盐催化C转化为U的化学反应概要
甲基化检测技术在疾病早筛领域持续火爆，2024-2025 年获国家药监局最新批准的甲基化检测试剂盒如下：
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思博士 ® MT-1A、Epo 及 Septin9 基因甲基化检测试剂盒（PCR 荧光探针法）2：2024 年 8 月 7 日获批（国械注准 20243401386），由博尔诚（北京）科技有限公司自主研发，是 NMPA 批准上市的首款食管癌血液基因甲基化检测产品，可通过测定外周血中肿瘤 DNA 特定位点（MT-1A、Epo 及 Septin9 基因）的甲基化程度，仅需 5ml 外周血即可实现食管癌的高效精准检出。
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人 CDO1 和 CELF4 基因甲基化检测试剂盒（PCR - 荧光探针法）10：2024 年 12 月 17 日获批（国械注准 20243402610），由北京起源聚禾生物科技有限公司研发，用于体外定性检测人宫颈脱落细胞 DNA 中 CDO1 和 CELF4 基因的甲基化水平。
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艾思宁 ®——KCNA3 和 OTOP2 基因甲基化联合检测试剂盒（荧光 PCR 法）：2025 年 1 月 21 日获批（国械注准 20253400207），由武汉艾米森自主研发，基于实时荧光 PCR 技术，通过检测血液 ctDNA 中的 OTOP2 和 KCNA3 基因甲基化程度实现对食管癌的早期检测。
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人 Twist1/Vimentin 基因甲基化检测试剂盒（荧光 PCR 法）：2025 年 1 月获批（国械注准 20253400083），由江苏为真生物医药技术股份有限公司研发，针对癌种为尿路上皮癌。
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GNB4 和 Riplet 基因甲基化联合检测试剂盒（荧光 PCR 法）：2025 年 1 月获批（国械注准 20253400101），由武汉艾米森生命科技有限公司研发，针对癌种为肝癌。
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人类 Septin9、SDC2 和 NDRG4 基因甲基化检测试剂盒（荧光 PCR 法）6：2025 年 3 月 6 日获批（国械注准 20253400481），由江苏健为诊断科技有限公司研发，用于体外定性检测人粪便样本 DNA 中 Septin9、SDC2 和 NDRG4 基因的甲基化状态，对判断患者结直肠癌的发生风险进行辅助诊断。
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人 CDO1/AJAP1/GALR1 基因甲基化检测试剂盒（荧光 PCR 法）1：2025 年获批，由武汉凯德维斯生物技术有限公司研发，对人宫腔脱落细胞样本中基因甲基化状态进行定性检测，用于疑似子宫内膜癌患者的辅助诊断。
2024年1月2日，芝加哥大学何川教授团队在Nature Biotechnology上在线发表了题为Ultrafast bisulfite sequencing detection of 5‑methylcytosine in DNA and RNA的研究论文，该研究提出并开发了对DNA和RNA上的5-甲基胞嘧啶修饰进行快速，准确检测的测序方法，简称为UBS-seq。该技术比现有的转化反应过程加速20-30倍，同时明显的降低了DNA损伤，以及C-U转化不彻底导致的背景干扰。
图2.UBS-seq法在微量样本中应用，传统BS转化相比有更低的背景噪音
统传统BS-seq:
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转化液浓度低，反应时间长，约3 h；
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在高 GC DNA 区域转化不充分；
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DNA降解严重；
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非甲基化区域优先降解。
Superfast BS-seq
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转化液浓度高，转化时间短，约5min；
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DNA降解程度低，转化后样本完整度好；
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GC区域转化率高，假阳性率低。
翌圣生物的Hieff® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit（柱式：12225ES）和Hieff® Mag Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit（磁珠法：12227ES）便是基于此技术开发优化而成，可以在98°C 5min条件下可完成＞99.5%的胞嘧啶转化，并且极大的降低了DNA损伤，更好的保证了DNA片段的完整性，约30 min可完成BS转化全流程，转化后的产物适用于PCR扩增和DNA测序等下游应用。
实验流程
图3.Superfast BS转化实验流程
产品亮点
产品亮点一：
优异的转化率
投入不用量的293gDNA，293gDNA参入0.5% λ DNA，使用12227（磁珠法）与竞品1转化试剂盒进行头对头对比，同时采用双链甲基化DNA建库（12214ES），如图4所示：12227（磁珠法）对不同投入量的DNA中 λ DNA C的转化率≥99.5%，转化时间适当延长，能进一步提高转化效率。
图4.12227和竞品的转化率
产品亮点二：优异的样本兼容率
10 ng cf DNA和50 ng FFPE DNA，cf DNA和FFPE DNA都参入0.5% λ DNA，使用12227（磁珠法）与竞品1转化试剂盒进行头对头对比，同时采用双链甲基化DNA建库（12214ES），如图5所示：12227（磁珠法）对不同样本中 λ DNA C的转化率≥99.5%，转化时间适当延长，能进一步提高转化效率。
图5
产品亮点三：
优异的回收率
投入不同量的293 DNA，使用12225和12227与竞品1转化试剂盒进行头对头对比，转化后采用Qubit ssDNA定量，计算回收率，如图6所示：12225的样本回收率能稳定达到60%以上，并且当样本量大于200 ng，回收率能超过70%，磁珠法转化试剂在高投入量下，回收率略低于柱式法，1 μg以内，磁珠法的回收率能达到60%。
图6.竞品1为磁珠法
产品亮点四：适用于单细胞甲基化建库
在微流控的自动化单细胞DNA甲基化平台上，进行单细胞甲基化转化实验，样本中单细胞DNA转化率在99%左右。
产品推荐
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产品名称 |
产品货号 |
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Hieff® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit超快速DNA亚硫酸氢盐转化试剂盒（柱式） |
12225ES |
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Hieff® Mag Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit超快速DNA亚硫酸氢盐转化试剂盒（磁珠法） |
12227ES |
翌圣DNA甲基化解决方案
